單寧含量檢測試劑盒說明書

紫外分光光度法

貨號：BC1390

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、標準品：10 mg單寧酸。臨用前加入1.175 mL提取液溶解為5000 nmol/mL的標準液，2-8℃保存兩周。

產(chǎn)品說明：

單寧又稱植物多酚，是一類廣泛存在于植物體內(nèi)的多元酚化合物。單寧可作為潛在的生物標記物；與蛋白質(zhì)結(jié)合的能力又稱為收斂性或澀性。其收斂性是多種生理活性的基礎，如止血、抗腫瘤、抗衰老等生理活性，也是影響產(chǎn)品口感的因素之一。

根據(jù)光譜特性，單寧在275nm下有較強的紫外吸收，通過利用活性炭能夠特異吸附單寧的性質(zhì)來檢測單寧含量。

技術指標：

低檢出限：0.385 nmol/mL

線性范圍：0.39-18 nmol/mL

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計、1mL石英比色皿、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、30-50目篩、蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

將樣本烘干至恒重，粉碎，過30-50目篩之后，稱取約0.1g，加入2mL提取液（封口膜封口防止液體濺出），于70℃水浴，準確提取30min，期間可搖晃數(shù)次。12000rpm，25℃，離心10min，取上清，用提取液定容至2mL，待測。

二、測定步驟

1. 紫外分光光度計預熱30min，波長調(diào)至275nm，提取液調(diào)零。

2. 標準液的稀釋：將標準液用提取液稀釋為25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.78125nmol/mL標準溶液。

3. 標準液稀釋可參考下表：

備注：實驗中每個標準管需1000µL標準溶液。

4. 加樣表：

充分混勻震蕩5min，13000g 室溫離心20min。取上清液測定275nm下的吸光度，分別記為A測定管、A對照管、A標準管、A空白管，計算ΔA測定=A對照管-A測定管，ΔA標準=A標準管-A空白管。每個測定管需設一個對照管。標準曲線和空白管只需測1-2次。

三、單寧含量計算

1. 標準曲線的繪制：

根據(jù)標準管的濃度（y，nmol/mL）和吸光度ΔA標準（x，ΔA標準），建立標準曲線。根據(jù)標準曲線，將ΔA測定（x，ΔA測定）帶入公式計算樣本濃度（y，nmol/mL）。

2. 單寧含量計算：

（1）按蛋白濃度計算

單寧含量（nmol/mg prot）=y×V提取÷(V提取×Cpr) =y÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計算

單寧含量（nmol/g 質(zhì)量）=y×V提取÷W=2y÷W

Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；V提?。禾崛∫后w積，2mL。

注意事項：

1. 如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。注意同步修改計算公式。

2. 按蛋白濃度計算時，由于提取液中含有破壞蛋白結(jié)構(gòu)的成分，故需要重新提取蛋白進行測定。

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