游離血紅蛋白（FHb）含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法

貨號(hào)：BC559

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 工作液：臨用前根據(jù)樣本量按照試劑一：試劑二：試劑三=500μL：500μL：25μL（1.025mL，約4T）的比例配制工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品：5mg血紅蛋白，臨用前加入1mL蒸餾水，充分混勻，配制成5mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液，2-8℃可保存4周。

產(chǎn)品說(shuō)明：

血管內(nèi)發(fā)生溶血時(shí)，紅細(xì)胞破裂，釋放出血紅蛋白，血漿中游離血紅蛋白（free hemoglobin，FHb）增多。自身免疫性溶血性貧血、鐮刀型細(xì)胞貧血、珠蛋白生成障礙性貧血患者血漿FHb有輕度至中度增加，陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥、陣發(fā)性嚴(yán)寒性血紅蛋白尿癥、不穩(wěn)定血紅蛋白病等會(huì)出現(xiàn)血尿癥狀。因此，血漿中FHb的測(cè)定對(duì)于臨床診斷溶血性疾病有重要作用。

血紅蛋白中的亞鐵血紅素有類似過(guò)氧化物酶的催化活性，能夠催化過(guò)氧化氫氧化4-氨基安替*林和苯胺類似物，生成紫色化合物，其在546nm有特征吸收峰，其顏色深淺與FHb含量成正比。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、冰和蒸餾水。

操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件

注意事項(xiàng)：

1. 若測(cè)定血漿樣本，采樣和分離血漿過(guò)程中避免發(fā)生溶血。

2. 若樣本測(cè)定管吸光值A(chǔ)測(cè)定＞1，建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。

3. 若樣本測(cè)定管吸光值A(chǔ)測(cè)定＜0.01或接近空白管吸光值，建議將樣本加樣量增大后再進(jìn)行測(cè)定，空白管和標(biāo)準(zhǔn)管加樣量也需進(jìn)行相應(yīng)調(diào)整。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取15µL兔血清樣本，按照測(cè)定步驟操作，用96孔板測(cè)得計(jì)算：ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白= 0.195-0.096=0.099，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0056x-0.03，計(jì)算x=23.036，計(jì)算FHb含量得：

游離血紅蛋白（FHb）含量（mg/L）=x×F=23.036 mg/L。

2. 取15µL馬血清樣本，按照測(cè)定步驟操作，用96孔板測(cè)得計(jì)算：ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白= 0.136-0.096=0.040，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0056x-0.03，計(jì)算x=12.5，計(jì)算FHb含量得：

游離血紅蛋白（FHb）含量（mg/L）=x×F=12.5 mg/L。

參考文獻(xiàn)：

[1] Reeder B, Svistune nko D, Cooper C, et al. The radical and redox chemistry of myoglobin and hemoglobin: from in vitro studies to human pathology [J]. Antioxid Redox Signal, 2004, 6(6): 954-966.

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