脂蛋白酯酶（LPL）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC2440
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前取1支加入1.5 mL丙 酮溶解備用，用不完的試劑-20℃保存4周；

2. 標準品：5 μmol/mL對硝基 *酚標準溶液。臨用前取30μL 5μmol/mL標準液，加入450μL試劑一充分混勻，配制成0.3125μmol/mL標準液使用，現(xiàn)用現(xiàn)配（實驗中每管需要100μL，為減小實驗誤差，故配制大體積）。

產(chǎn)品說明：
脂蛋白酯酶（Lipoproteinlipase，LPL）是甘油三酯降解的降速酶，可催化甘油三酯水解為脂肪酸和單酸甘油酯，主要在肝臟實質細胞中合成，在脂質代謝和轉運中發(fā)揮重要作用。
脂蛋白酯酶水解4-硝基 苯棕櫚酸酯產(chǎn)生4-硝基*酚，在400nm有特征吸收峰。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫臺式離心機、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、EP管、冰、丙 酮和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（10⁴個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質量（g）：試劑一體積（mL）為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣本：直接檢測。
二、測定步驟

1. 分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至400nm，蒸餾水調零。

2. 操作表：在1.5mL EP管中進行下列操作：

三、LPL活性計算
1、血清（漿）LPL活力計算
單位定義：在45℃，pH7.5條件下，每毫升血清每分鐘水解產(chǎn)生1nmol 4-硝基 *酚為一個酶活力單位。
LPL（U/mL）=ΔA÷（ΔA標準÷C標準）÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA標準
2、組織、細菌或細胞中LPL活力計算
（1）按樣本質量計算
單位定義：在45℃，pH7.5條件下，每克組織每分鐘水解產(chǎn)生1nmol 4-硝基*酚為一個酶活力單位。
LPL（U/g 質量）=ΔA÷（ΔA標準÷C標準）×V提取÷W÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA標準÷W
（2）按樣本蛋白濃度計算
單位定義：在45℃，pH7.5條件下，每毫克蛋白每分鐘水解產(chǎn)生1nmol 4-硝基*酚為一個酶活力單位。
LPL（U/mg prot）=ΔA÷（ΔA標準÷C標準）×V提取÷（V提取×Cpr）÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA標準÷Cpr
（3）按細菌或細胞數(shù)量計算：
單位定義：在45℃，pH7.5條件下，每10⁴個細胞每分鐘水解產(chǎn)生1nmol 4-硝*酚為一個酶活力單位。
LPL（U/10⁴ cell）=ΔA÷（ΔA標準÷C標準）×V提取÷N÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA標準÷N
C標準：標準溶液濃度，0.3125μmol/mL；V提?。杭尤朐噭┮惑w積，1mL；T：反應時間，10min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；N：細菌或細胞總數(shù)，以萬計；1000：單位換算系數(shù)，1μmol=1000nmol。
注意事項：

1. 測定管加入試劑二后混變渾濁為正?，F(xiàn)象。

2. 若A大于1，將粗酶液用試劑一稀釋后再進行測定。

實驗實例：

1. 取0.1g大鼠肌肉加入1mL試劑一，取上清后按照測定步驟操作，測得計算ΔA=A測定管- A對照管=0.697-0.160=0.537，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.545-0.001=0.544，按樣本質量計算酶活得：LPL（U/g 質量）= 31.25×ΔA÷ΔA標準÷W=31.25×0.537÷0.544÷0.1=308.48 U/g 質量。

2. 取兔血清稀釋2倍后按照測定步驟操作，測得計算ΔA=A測定管- A對照管=0.639-0.096=0.543，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.545-0.001=0.544，按血清（漿）體積計算酶活得：LPL（U/mL）= 31.25×ΔA÷ΔA標準×2（稀釋倍數(shù)）=31.25×0.543÷0.544×2（稀釋倍數(shù)）=62.39 U/mL。

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