過氧化物酶（POD）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC0095
規(guī)格：100T/96S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：液體置于試劑瓶內EP管中，使用前需先離心。

2. 試劑二工作液：取0.01mL試劑二加入3.2 mL試劑一混合備用（約106T），現(xiàn)配現(xiàn)用，也可根據(jù)樣本量按比例配制。

產品說明：
POD（EC 1.11.1.7）廣泛存在于動物、植物、微生物中，可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物，具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。POD在有過氧化氫存在的情況下，能使愈創(chuàng)木酚發(fā)生氧化，生成茶褐色物質，該物質在470nm有最大光吸收。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
注意事項：

1. 如一次測定的樣本數(shù)量較多，試劑一、試劑二工作液、試劑三和蒸餾水按照比例混合，在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）放置10min，測定時加入240μL即可。

2. 樣本測定值如果小于0.005，可將反應時間延長到3-5分鐘，計算時除以反應時間即可；如果高于0.8或者反應液中有較多氣泡產生，可將樣本用提取液進行稀釋。計算時乘以相應的稀釋倍數(shù)即可。

實驗實例：
取0.1043g大鼠心臟加入1mL提取液進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 10min，取上清置冰上，用提取液稀釋2倍后按照測定步驟操作，用微量玻璃比色皿測定并計算ΔA=A2-A1=0.6257-0.2351=0.3906。按樣本質量計算含量得：
POD活性（U/g 質量）=4900×ΔA÷W×2（稀釋倍數(shù)）=3.67×10⁴ U/g 質量。
取0.1049g黃楊葉片，加入1mL提取液進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 10min，取上清置冰上，按照測定步驟操作，用微量玻璃比色皿測定并計算ΔA=A2-A1=0.8512-0.1313=0.7199。按樣本質量計算含量得：
POD活性（U/g 質量）=4900×ΔA÷W=3.363×10⁴ U/g 質量
相關發(fā)表文獻：

1. Yin Y J, Chen C J, Guo S W, et al. The fight against Panax notoginseng root-rot disease using zingiberaceae essential oils as potential weapons[J]. Frontiers in plant science, 2018, 9: 1346.

2. Dou S, Liu S, Xu X, et al. Octanal inhibits spore germination of Penicillium digitatum involving membrane peroxidation[J]. Protoplasma, 2017, 254(4): 1539-1545.

3. Li B, Ding Y, Tang X, et al. Effect of L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus) [J]. Food and Bioprocess Technology, 2019, 12(4): 563-574.

4. Yanan Wang,Chengzhen Liang,Zhigang Meng,et al. Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton. Environmental and Experimental Botany. June 2019; 162:364-373. (IF3.712)

5. Yanjiao Yin,Chuanjiao Chen,Shiwei Guo,et al. The Fight Against Panax notoginseng Root-Rot Disease Using Zingiberaceae Essential Oils as Potential Weapons. Frontier in Immunology. October 2018;(IF4.716)

參考文獻：
[1] Reuveni R. Peroxidase Activity as a Biochemical Marker for Resistance of Muskmelon (Cucumis melo) to Pseudoperonospora cubensis[J]. Phytopathology, 1992, 82(7).
[2] Doerge D R, Divi R L, Churchwell M I. Identification of the Colored Guaiacol Oxidation Product Produced by Peroxidases[J]. Analytical Biochemistry, 1997, 250(1):10-17.
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